做美缝的步骤和注意事项（rt pcr的步骤和注意事项）

您好,今天小编胡舒来为大家解答以上的问题。做美缝的步骤和注意事项，rt pcr的步骤和注意事项相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧！

1、实验中的一些好习惯加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。

2、2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用)。

3、3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。

4、4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。

5、然后用高压灭菌除去残留的DEPC。

6、不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。

7、5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。

8、6. 设置RNA操作专用实验室，所有器械等应为专用。

9、二、常用的RNA酶抑制剂1. 焦磷酸二乙酯(DEPC):是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。

10、它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。

11、2. 异硫氰酸胍:目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。

12、它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。

13、3. 氧钒核糖核苷复合物:由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和RNA酶结合形成过渡态类物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性。

14、4. RNA酶的蛋白抑制剂(RNasin):从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。

15、RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂，可以和多种RNA酶结合，使其失活。

16、5. 其它:SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用。

17、因为DEPc不加选择的修饰蛋白质和RNA，因此在分离和纯化RNA过程中不能使用，而且它与一些缓冲液(例如Tri)不能相容在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。

18、而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。

19、RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。

20、研究人员造成的污染 RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。

21、因此进行RNA实验时应勤换手套。

本文就为大家分享到这里，希望小伙伴们会喜欢。